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¿Cómo Solucionar Los Archivos Adjuntos Del Solucionador De Problemas De Eliminación De ADN?

Solucione los errores de Windows y proteja su computadora de la pérdida de archivos, malware y fallas de hardware

Recientemente, algunos compradores nos informaron que descubrieron archivos adjuntos para solucionar problemas de extracción de ADN.Las plantas son mucho más variadas en su biología en comparación con otros organismos, además de la gran cantidad de metabolitos primarios y secundarios observados en las plantas, los polifenoles y los polisacáridos afectan casi fuertemente la extracción de ADN a través de la oxidación del ADN, la unión covalente a los nucleótidos y también, enzimática. reacciones de conquista.

Consumibles

plantas de resolución de problemas de extracción de ADN

Dihidrato de cloruro de sodio disódico de ácido etilendiaminotetraacético (EDTA) (Chem Supply No pet cat. RI ea023)

eco (no requerido)Sí, se usa con respecto a la garantía de calidad) (número de pieza NEB R0101S)

Hin dIII-HF (no crítico – utilizado para aseguramiento premium) Cat (neb No. Buffer: r3104s)

Reactivos

Extracción de un Tris-HCl mM particular (pH 7,5), EDTA veinte mM, NaCl 1,5 M, CTAB al 2 % (p/v) y uno al 0,3 % (v/v) del tipo β-mercaptoetanol se agregan antes de usar

Centrífuga (puedes mezclar líneas de centrífuga desde 50 ml hasta cinco mil µg)

  • Congelador 20°C

  • Material vegetal, luego muestras de tejido

    Tejido foliar de Corymbia citriodora subsp. Variegata, Corymbia henryi, Corymbia torelliana y Corymbia citriodora subsp. citriodora se consideró obtenida del Departamento de Agricultura, Pesca y Silvicultura de Queensland en Australia, Gympie. El tejido de hoja de café Brassii se obtuvo del Australian Tropical Herbarium en Cairns, Australia. El material de la hoja después de la recolección se transportó en condiciones de nieve y se almacenó a -80 °C hasta la extracción de ADN.

    Periódico

    Pasos preliminares

    Refrigerar este fantástico mortero (para ayudar a descongelar el tejido helado) al 95% antes de picar, nunca debe olvidarse la solución de Etanol que hay en el mercado a -20°C. Precaliente el agua de lavado (65 °C o 37 °C) antes de la toma de muestras. Después de precalentar, prepare 10 ml (por 1 r de tejido de eliminación de hojas) de tampón agregando 0,3 % (v/v) de β-mercaptoetanol a un solo tubo Falcon de 50 ml y precaliente el agua a 65 °C en una solución sólida de agua. bañera. También puedes incorporar combate entre jugadores a este tipo de puntos, pero esto es totalmente innecesario.

    aplastamiento y destrucción de tejidos

    No permita que los errores de Windows lo detengan.

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  • Paso 1: Descargue e instale Reimage
  • Paso 2: Inicie la aplicación y seleccione su idioma
  • Paso 3: siga las instrucciones en pantalla para iniciar un análisis de su computadora

  • Usando el nitrógeno del agua, moler 1g de hojas cortadas en nieve fina. Agregue natural a este nuevo tubo Falcon de 50 ml y/o mezcle con tampón de eliminación precalentado. Coloque la muestra en cualquier tipo de baño de agua a 65°C durante media hora minutos a 1 hora cada diez minutos y mezcle por inversión. Después de la incubación, centrifugue el tubo de muestra a 5000 Åv durante 5 minutos (para eliminar y precipitar el tejido del follaje no lisado) y transfiera el sobrenadante a su propio tubo Falcon para principiantes de 50 ml.

    Localización remota de proteínas y tratamiento con ARNasa

    Añadir 1 parte de cloroformo: alcohol isoamílico al medicamento y revolver girando unos 5 minutos. Centrifugue la muestra durante 10 min a 5000 µg y simplemente transfiera la fase acuosa a un nuevo tubo Falcon definitivo, teniendo cuidado de que pueda omitir la interfaz entre las capas generalmente acuosas y orgánicas. Agregue 7 µl de RNase A (10 mg/ml) a la solución, luego incube cerca de los 37°C durante 15 minutos, revolviendo ocasionalmente. Después de la incubación, se añade 1 volumen de cloroformo: isoamilo bebible para terapia y se agita por inversión durante 5 minutos. Centrifugar la solución durante 10 llamadas a 5000 µl y pipetear toda la solución acuosa en el Falcon New Underground, eliminando nuevamente la capa normal.

    Precipitación

    plantas de solución de problemas de extracción de ADN

    Agregue la mitad de su volumen de NaCl 5M que elija tomar y mezcle suavemente invirtiendo. Luego agregue 3 partes ligadas a etanol al 95% frío, pero mezcle suavemente por inversión. Coloque los tubos en el mejor congelador a -20°C e incube durante 1 h. NOTA. Nunca deje la muestra completa a -20 °C durante más de 1 hora, ya que ciertos tipos de CTAB y NaCl definitivamente pueden precipitarse fuera del suplemento e interferir con el aislamiento del ADN.

    ¿Por qué es difícil la extracción de ADN de los ramos?

    La eliminación de ADN a partir de tejidos vegetales, en contraste con cada aislamiento de ADN de regiones de mamíferos, es difícil debido a la igualdad de derechos de la selección celular rígida alrededor de las células vegetales en crecimiento. Los métodos utilizados actualmente, como todos saben, requieren un paso de perturbación mecánica muy laborioso, que es necesario para detener el agua celular para liberar su ADN.

    Después de la incubación, centrifugue una lactancia cilíndrica Falcon a 5000 x g durante diez minutos para sedimentar el ADN. Decantar con cuidado el sobrenadante y lavar su sedimento de ADN con 3 ml de etanol al 70%. Agite suavemente el misterio y vuelva a centrifugar a × cinco mil durante 10 min. Decantar suavemente el sobrenadante actual y secar al aire el sedimento de ADN a temperatura ambiente durante doce minutos. Después del secado, el ADN se suspende en 200 µl de tampón TE.

    Evaluación de la calidad y cantidad relacionada con el ADN

    Evalúe la calidad específica del ADN extraído con un espectrofotómetro NanoDrop UV/Vis con gelificación de agarosa al 0,7 % (p/v), pero también busque un único ápice de absorbancia en A 260 nm, factor contribuyente de absorbancia 260/280 1,8-2,0, no hay signos y síntomas de un cambio fuerte o enfermedad del brazalete (ARN potencialmente polisacárido).

    Comentarios

    ¿En qué se diferencia la eliminación de ADN en las plantas?

    Extracción de ADN vegetal El ADN genómico vegetal es extremadamente difícil de aislar debido a la pared celular vegetal que lo rodea. Puede rechazarlo homogeneizando y agregando más celulasa para descomponer la celulosa que forma la pared celular.

    Desde la aparición del procedimiento de extracción basado en ctab derivado de hojas de plantas por parte de Doyle y su sucesor en 1987, muchas personas han publicado iteraciones alternativas, una con modificaciones indicando que los co-extractos agregados a los polifenoles aportan polisacáridos que se encuentran en el sauce. la hoja conectó muchos géneros de plantas [3, 5 8, 15]. Aunque han demostrado productividad en el aislamiento de ADN, a menudo susceptible de amplificación por PCR, posiblemente por digestión de restricción, casi los métodos comúnmente publicados en los materiales deben incluir incubaciones prolongadas y lluvia de etanol ajustable y pasos de lavado: producir ADN genómico libre de ARN con una pureza extremadamente alta para obtener Debido a que se requerían cantidades muy grandes de ADN de alta calidad para la secuenciación de próxima generación, por lluvia y lavado adicional aumenta el tiempo de ejecución y reduce el rendimiento general Los kits comerciales de aislamiento de columnas como DNeasy (Qiagen, Australia) o Wizard (Promega, Australia) son muy eficientes en divorcio ADN no contaminado de especies resistentes, además de eucalipto [

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