• Home
  • Как исправить вложения средства устранения неполадок устранения ДНК?

Как исправить вложения средства устранения неполадок устранения ДНК?

Исправьте ошибки Windows и защитите свой компьютер от потери файлов, вредоносного ПО и аппаратного сбоя

Недавно всего несколько пользователей сообщили нам, что эти люди столкнулись с вложениями для устранения неполадок извлечения ДНК.Растения гораздо более разнообразны по своей биологии по сравнению с другими организмами, помимо определенных тысяч первичных и дополнительных метаболитов, обнаруженных в растениях, полифенолы, а затем и полисахариды наиболее сильно влияют на экстракцию ДНК, используя окисление ДНК, ковалентное связывание, возвращающееся к нуклеотидам. и ферментативные реакции завоевания.

Расходные материалы

растения для устранения неполадок при экстракции ДНК

Этилендиаминтетрауксусная кислота, дигидрат динатрия хлорида натрия (ЭДТА) (Chem Supply No pet pet. RI ea023)

эко (не требуется)Да — используется для обеспечения качества) (номер детали NEB R0101S)

Hin dIII-HF (некритичный — используется для обеспечения качества) Cat (neb No. Buffer: r3104s)

Реагенты

Экстракция 100 мМ трис-HCl (рН 7,5), 15 мМ ЭДТА, 1,5 М NaCl, 2% (масса/объем) ЦТАБ и 0,3% (объем/объем) эффектного β -меркаптоэтанол добавляют непосредственно перед использованием

Центрифуга (можно добавить центрифужные пробирки от 50 мл до 4000 мкг)

<ул>

  • Морозильник 20°C

  • Растительный материал, затем образцы тканей

    Ткань листа Corymbia citriodora subsp. Variegata, Corymbia henryi, Corymbia torelliana и Corymbia citriodora subsp. citriodora был получен от Министерства сельского хозяйства, рыболовства и лесного хозяйства Квинсленда в Австралии, Gympie. Мышечная ткань кофейного листа Brassii была получена из Австралийского тропического гербария в Кэрнсе, Австралия. Материал постельного белья после сбора транспортировался на льду и хранился при температуре -80°C для окончательной экстракции ДНК.

    Газета

    Предварительные шаги

    Охладите эту памятную ступку и пестик (чтобы помочь разморозить замороженные ткани) до 95% перед опусканием, не забывайте, что этаноловая терапия доступна при -20°C. Перед отбором проб подогрейте ванну с водой (65°C или 37°C). После предварительного нагрева приготовьте 10 мл (только на один г ткани для удаления листьев) препятствия путем добавления 0,3% (об./об.) β-меркаптоэтанола к 50-мл пробирке Фалькона и подогрейте воду до 65°С на водяной бане. Иногда к этому ключевому факту можно добавить битву между игроками, но это далеко не обязательно.

    дробление и разрушение плоти

    Не позволяйте ошибкам Windows сдерживать вас.

    Ваш компьютер работает медленно? Он страдает от странных сообщений об ошибках и странного поведения системы? Если это так, есть большая вероятность, что вам нужен Reimage. Это мощное программное обеспечение быстро и легко исправит распространенные ошибки Windows, защитит ваши данные от потери или повреждения и оптимизирует вашу систему для достижения максимальной производительности. Так что больше не мучайтесь с медленным, разочаровывающим компьютером — скачайте Reimage сегодня!

  • Шаг 1. Загрузите и установите версию Reimage.
  • Шаг 2. Запустите приложение и выберите язык
  • Шаг 3. Следуйте инструкциям на экране, чтобы начать сканирование компьютера.

  • Используя жидкий азот, измельчите 1 г замороженных листьев в мелкий снег. Добавьте порошок в эту новую пробирку Falcon объемом 50 миллилитров и/или смешайте с предварительно подогретым экстракционным буфером. Поместите образец на водяную баню при температуре 65°C, чтобы получить от 30 минут до 1 часа почти каждые 10 минут, и перемешайте путем переворачивания. После инкубации отцентрифугируйте пробирку с образцом при 5000 Åv в течение 5 раз (для удаления и осаждения нелизированной ткани листвы) и перенесите надосадочную жидкость в пробирку Falcon noob объемом 50 мл.

    Выделение белка и обработка РНКазой

    Добавьте 1 часть хлороформа: изоамилового спирта к лекарству и перемешайте, вращая в течение 5 минут. Центрифугируйте структуру в течение 10 мин при 6000 мкг и перенесите водную фазу, чтобы позволить им новую пробирку Falcon, принимая во внимание, чтобы пропустить границу раздела между некоторыми водными и органическими слоями. Добавьте к раствору 3 мкл РНКазы А (10 мг/мл), затем инкубируйте при 37°C в течение 15 минут, многократно перемешивая. После инкубации добавляют 1 объем, связанный с хлороформом: изоамиловым спиртом для терапии, так что инверсию перемешивают все пять минут. Центрифугируйте раствор в течение 10 минут на 5 000 мкл, но также пипеткой перелейте водный раствор в Falcon New Underground, снова удалив естественный слой.

    Осадки

    Устранение неполадок при экстракции ДНК

    Добавьте 1/2 объема 5M NaCl, который кто-то хочет взять, и перемешайте, просто перевернув. Затем добавляют 3 л холодного 95% этанола, но добавляют осторожно, переворачивая. Поместите понтоны в лучшую морозильную камеру при температуре -20 ° C и инкубируйте в течение 1 часа. ПРИМЕЧАНИЕ. Не оставляйте весь образец при температуре -20 °C более чем на 1 человека, поскольку некоторые типы ЦТАБ, а также NaCl могут определенно осаждаться в растворе и мешать выделению ДНК.

    Почему сложно выделить ДНК из растений?

    Удаление ДНК из растительных тканей, в отличие от выделения ДНК, происходящей из тканей млекопитающих, затруднено из-за того, что в настоящее время существует равенство жесткой клеточной селекции почти растительных клеток. Известные в настоящее время методы неизбежно требуют очень трудоемкого этапа аппаратного разрушения, который необходим, чтобы помочь вам разрушить клеточную воду, чтобы начать ДНК.

    После инкубации отцентрифугируйте круглую пробирку Falcon при 5000 x g в течение 10 минут, чтобы осадить ДНК. Осторожно декантируйте супернатант и смойте осадок ДНК 3 миллилитрами 70% этанола. Аккуратно встряхните часть раствора и снова отцентрифугируйте на × 5000 в течение 10 мин. Аккуратно декантируйте супернатант и высушите на воздухе самый важный осадок ДНК при комнатной температуре через 15 мин. После сушки ДНК суспендируют в 200 мкл относительно ТЕ-буфера.

    Оценка качества и общего количества ДНК

    Оцените специфическое качество выделенной ДНК с помощью спектрофотометра NanoDrop UV/Vis с 0,7% (масс./об.) гелеобразования агарозы, но также ищите пик поглощения без спаривания при A 260 нм, переменная абсорбция 260/280 1,8-2,0, там нео-признаки сильного сдвига или, возможно, даже загрязнения браслета (РНК или, возможно, полисахарида).

    Комментарии

    Чем отличается экстракция ДНК у растений?

    Экстракция ДНК растений Геномную ДНК растений очень трудно выделить из-за самой важной обширной клеточной стенки растений. Вы можете удалить его путем гомогенизации и обработки целлюлазой, чтобы разрушить всю целлюлозу, из которой состоит подвижная стенка.

    С момента появления в 1988 году Дойла и его преемника метода искоренения на основе ctab, основанного на листьях растений, было предложено множество альтернативных итераций, одна с модификациями, указывающими что основные сопутствующие экстракты, добавленные к полифенолам, содержат полисахариды, содержащиеся в иве. листва многих родов растений [3, 5 8, 15]. Хотя они продемонстрировали продуктивность работы при выделении ДНК, часто поддающуюся возврату к ПЦР-амплификации, возможно, путем рестрикции, все методы, обычно публикуемые в некоторой литературе, должны включать длительные инкубации, а также несколько точек дождя и промывки этанолом для получения геномной ДНК без РНК. оснащенных высокой степенью чистоты для получения Поскольку для следующего производственного секвенирования требуется действительно большое количество высококачественной ДНК, каждый дополнительный дождь и промывка максимизируют время обработки и снижают общий доход. , Австралия) очень эффективно отделяют незагрязненную ДНК от устойчивых видов, например эвкалипта [

    Для тех, у кого возникли проблемы с компьютером, нажмите здесь, чтобы загрузить этот рекомендуемый инструмент восстановления.

    г.